微生物有機(jī)肥料中有效活菌數(shù)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定方法及步驟

（1）稀釋

稱取固體樣品10g，加入帶玻璃珠的100ml的無(wú)菌水中，靜置20分鐘，在旋轉(zhuǎn)式搖床上200r/min充分震蕩30分鐘，即成母液菌懸液。

用5ml無(wú)菌轉(zhuǎn)液管分別吸取5ml上述母液菌懸液加入45ml無(wú)菌水中，按1比10進(jìn)行系列稀釋，分別得到10-1,10-2,10-3、、、稀釋倍數(shù)的菌懸液。

（2）加樣及培養(yǎng)

每個(gè)樣品取3個(gè)連續(xù)適宜稀釋度，用0.5ml無(wú)菌移液管分別吸取不同稀釋度菌懸液0.1ml，加至預(yù)先制備好的固體培養(yǎng)基平板上，分別用無(wú)菌玻璃刮刀將不同稀釋度的菌懸液均勻地涂布于瓊脂表面。

每一稀釋度重復(fù)3次，同時(shí)以無(wú)菌水作空白對(duì)照，于適宜的條件下培養(yǎng)。

（3）菌落識(shí)別

根據(jù)所檢測(cè)菌種的技術(shù)資料，每個(gè)稀釋度取不同類型代表菌落通過涂片、染色、鏡檢等技術(shù)手段確認(rèn)有效菌。當(dāng)空白對(duì)照培養(yǎng)皿出現(xiàn)菌落數(shù)時(shí)，檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，應(yīng)該重做。

（4）菌落計(jì)數(shù)

以出現(xiàn)20-30個(gè)菌落數(shù)的稀釋度的平板為計(jì)數(shù)標(biāo)準(zhǔn)，（絲狀真菌為10-150個(gè)菌落數(shù)），分別統(tǒng)計(jì)有效活菌數(shù)目和雜菌數(shù)目。當(dāng)只有一個(gè)稀釋度，其有效菌平均菌落數(shù)在20-300個(gè)之間時(shí)，則以該菌落數(shù)計(jì)算。若有兩個(gè)稀釋度，其有效菌落數(shù)在20-300個(gè)之間時(shí)，應(yīng)該兩者菌落總數(shù)之比值決定，若其比值小于等于2應(yīng)該計(jì)算兩者的平均數(shù)；若大于2，則以稀釋度小的菌落數(shù)平均數(shù)計(jì)算。有效活菌數(shù)按下列公式計(jì)算，同事計(jì)算雜菌數(shù)。

N1=(x*k*v1/m0*v2)*108    N2=(x`*k*v1/v0*v2)*108

式中：

N1——————質(zhì)量有效活菌數(shù)，單位為億每克；

N2——————體積有效活菌數(shù)，單位為億每毫升；

x·——————有效菌落平均數(shù)；

K———————稀釋倍數(shù)；

V1———————基礎(chǔ)液體積，單位為毫升；

V2———————菌懸液加入量，單位為毫升；

V0———————樣品量，單位為毫升；

M0———————樣品量，單位為克。